菠萝蛋白酶检测试剂盒福林酚微板法

菠萝蛋白酶检测试剂盒（福林酚微板法）

产品货号:BA

产品规格:T

产品简介：

菠萝蛋白酶(Bromelain)简称菠萝酶，亦称凤梨酶、凤梨酵素等，是存在于菠萝植株中的蛋白水解酶，可从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到，菠萝蛋白酶已被广泛应用于食品、医药等行业。利用吸附力、离子键、共价键等不同的联结方式，将酶与不溶性载体联结，制成固定化酶，可以很好的避免酶的失活，易于储存运输。

菠萝蛋白酶检测试剂盒(福林微板法)检测原理是通过蛋白酶催化底物酪蛋白，后者水解生成酪氨酸，酪氨酸含有酚羟基，可与福林试剂发生福林反应，即福林试剂在碱性条件下容易定量的被酚类化合物还原，生成钨蓝和钼蓝的混合物，呈现不同深浅的蓝色。于酶标仪检测吸光度，以吸光度的大小与酪氨酸含量的多少有关，吸光度大说明酪氨酸含量高，也就是说菠萝蛋白酶分解的酪蛋白多，酶活性高。该试剂盒主要用于植物组织尤其时菠萝的匀浆液中菠萝蛋白酶活性，尤其适用于检测菠萝中菠萝蛋白酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1.蒸馏水

2.研钵或匀浆器

3.离心管

4.离心机

5.酶标板

6.酶标仪

操作步骤（仅供参考）：

1.准备样品：

①植物样品：取菠萝肉或植物组织，切碎后在研钵或匀浆器中加入等体积组织匀浆液进行研磨或匀浆，静置，滤纸过滤或纱布过滤。留取滤液，边搅拌边加入BromelainLysisbuffer，搅拌，静置。离心，弃上清液，收集沉淀，加入Bromelain洗脱液，搅拌洗脱。离心，取上清液，冻存，用于菠萝蛋白酶的检测。

②固定化酶：称取适量的固定化酶，溶解于组织匀浆液，混匀，待用。

③高活性样品：如果样品中含有较高活性的菠萝蛋白酶，可以使用蒸馏水或组织匀浆液进行恰当的稀释。

2.制作酪氨酸标准：取适量的酪氨酸标准，按下表配制不同浓度的酪氨酸标准备用。

3.处理待测样品：取两支离心管，分别加入待测样品。一支置于孵育后加入提前孵育的酪蛋白溶液，混匀，准确孵育，立即加入酪蛋白终止液，迅速摇匀灭活，作为测定液。同时取另一支直接加入酪蛋白终止液，迅速摇匀灭活，加入提前孵育的酪蛋白溶液，混匀，准确孵育，作为对照液。以上两支含有测定液和对照液的离心管室温放置。离心，分别取上清液待用。

4.加样：按照下表设置对照孔、标准孔、测定孔。溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的菠萝蛋白酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行管，求平均值。

5.菠萝蛋白酶检测：充分混匀，孵育显色，立即以酶标仪，以对照孔为对照，测定测定孔的吸光度。同时以酪氨酸标准0号孔为空白对照，测定系列酪氨酸标准(1-5号孔)的吸光度。

计算：

以酪氨酸浓度(mg/ml)为横坐标，以对应的吸光度值为横坐标，绘制酪氨酸标准曲线。通过横坐标的吸光度值，在标准曲线上查得各测定孔中酪氨酸浓度(mg/ml)。

菠萝蛋白酶活性单位的定义：在该实验条件下，水解酪蛋白产生酪氨酸所需的酶量为一个活性单位。其比活力定义：其每毫克蛋白所含蛋白酶活力单位得数量。

菠萝蛋白酶(U)={测定管酪氨酸浓度×2×0}/15

注意事项:

1.待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

2.菠萝蛋白酶提取时，注意低温操作，防止酶活性，亦可-20℃保存。

3.如果没有分光光度计，也可以使用普通的酶标仪测定。每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。

4.离心时最好采用低温离心机，常温离心机也可。

有效期：6个月有效。

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