技术酵母水解物中小肽的测定方法及意义

　　湖北海宜揭示您 　　酵母中含有三类大分子：卵白质、核酸和多糖，此中卵白质险些占了干物资一半以上的含量，定然氨基酸充溢，呈味氨基酸充实，总谷氨酸含量在6%以上，色氨酸在1%以上，以是酵母水解物诱食性绝佳。

　　新鲜酵母中的卵白质经水解后孕育的肽类物资，曾引发大师和配方师们的普遍 　　一、甚么是小肽？

　　肽是卵白质降解为游离氨基酸历程中的中心产品，一般将大于20个的氨基酸残基孕育的肽称为多肽（Poly-peptide），2-20个氨基酸残基孕育的肽称为寡肽(Oligopeptide)，而将仅由2个或3个氨基酸残基孕育的二肽和三肽称之为小肽（Smallpeptide）。（参考《动物养分学》第三版）

　　二、小肽含量的探测法子：

　　1、大豆肽粉，国标：GB/T-

　　旨趣：采纳高效凝胶过滤色谱法测定。即以多孔性填料为牢固相，根据样本组分相对分子品质巨细的不同实行别离，在肽键的紫外汲取波长nm前提下探测，行使凝胶色谱法测定相对分子品质散布的专用数据管教软件（即GPC软件），对色谱图及其数据实行管教，祈望获得大豆肽的相对分子品质巨细及散布局限。

　　本法实用于以大豆粕或大豆卵白等为质料，用酶解或微生物发酵法临盆的，相对分子品质在如下，首要成份为肽的粉末状物资。

　　2、海洋鱼低聚肽粉，华夏轻工行业准则：QB/T-

　　2.1低聚肽

　　法子旨趣：低分子量的卵白质水解物（包罗低聚肽及游离氨基酸）可溶于三氯乙酸溶液；高分子品质的卵白质在三氯乙酸溶液中易沉没。样本经三氯乙酸溶液熔解后，离心别离出沉没卵白质，搜聚离心清液。依照GB/T.5划定的法子测定离心清液的酸溶卵白质水解物含量，清液的酸溶卵白质水解物含量减去游离氨基酸含量即获得低聚肽的含量。

　　该法仅能够概略测出样本中的三氯乙酸可溶性氮，况且不能扣除核酸中的含氮碱基对探测完毕的侵犯，加倍不能精准探测二肽、三肽详细含量是几许。

　　2.2相对分子品质小于u的卵白质水解物所占比例（高效凝胶过滤色谱法）

　　法子旨趣：相对分子品质小于u的卵白质水解物（包罗低聚肽和小批游离氨基酸）所占比例，采纳高效凝胶过滤色谱法测定。即以多孔性填料为牢固相，根据样本组分分子体积巨细的不同实行别离，在肽键的紫外汲取波长nm前提下探测，行使凝胶色谱测定相对分子品质散布的专用数据管教软件（即GPC软件），对色谱图及其数据实行管教，祈望获得卵白质水解物的相对分子品质巨细及散布局限，从而获得相对分子品质小于u的卵白质水解物（包罗低聚肽和小批游离氨基酸）所占比例。

　　本法实用于以海洋鱼皮、鱼骨或鱼肉为质料，用酶解法临盆的，相对分子品质低于的低聚肽（短肽）为首要成份的粉末。

　　三、卵白质的含量测定法子

　　卵白质的含量测定是生化方剂钻研最罕用、最根底的解析法子之一。当今罕用的测定法子有凯氏定氮法、福林酚法、双缩脲法、BCA法、考马斯亮蓝法、紫外分光光度法及荧光法。《欧洲药典》6.0版、《英国药典》年版及《美国药典》32版附录中均收载了上述七种法子，《华夏药典》年版三部附录仅收载了上述测定法子中的前三种。如下仅供参考：

　　3.1凯氏定氮法：

　　旨趣：本法系根据卵白质为含氮的有机化合物，当与硫酸和硫酸铜、硫酸钾一齐加热消化时使卵白质分解，分解的氨与硫酸连系生成硫酸铵。而后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸液汲取后以硫酸滴定液滴定，凭借酸的耗损量乘以氮变化为卵白质的换算系数，即为卵白质的含量。凯氏定氮法虽耗时较长，但它是卵白质测定法子中最典范的测定法子，本法所测的完毕为卵白质绝对浓度而非相对浓度，可用于准则卵白质含量的明确测定。

　　3.2福林酚法：

　　旨趣：本法系根据卵白质分子中含有的肽键在碱性溶液中与Cu2+螯合孕育卵白质-铜复合物，此复合物使酚试剂的磷钼酸复原，孕育蓝色化合物，同时在碱性前提下酚试剂易被卵白质中酪氨酸、色氨酸、半胱氨酸复原呈蓝色反映，在必然局限内其颜色深浅与卵白质浓度呈正比，以卵白质对比品溶液做准则弧线，采纳比色法测定供试品中卵白质的含量。

　　3.3双缩脲法：

　　旨趣：本法系根据卵白质分子中含有的两个以上肽键在碱性溶液中与Cu2+孕育紫血色络合物，在必然局限内其颜色深浅与卵白质浓度呈正比，以卵白质对比品溶液做准则弧线，采纳比色法测定供试品中卵白质的含量。

　　3.4Bradford法（考马斯亮蓝法）：

　　旨趣：考马斯亮蓝（CBB）测定卵白质含量属于染料结正当的一种。考马斯亮蓝在游离状况下呈血色，最大光汲取在nm；当它与卵白质连系后变成青色，卵白质—色素连系物在nm波长下有最大光汲取。其光汲取值与卵白质含量成正比，是以可用于卵白质的定量测定。卵白质与考马斯亮蓝连系在2min左右的时光内抵达均衡，完竣反映特地加紧；其连系物在室温下1h内坚持安稳。该法试剂配制容易，操纵轻松加紧，反映特别机灵，机灵度比Lowry法还高4倍，可测定微克级卵白质含量，测定卵白质浓度局限为0～μg/ml，是一种罕用的微量卵白质加紧测定法子。

　　四、小结:

　　小肽(二肽、三肽)做为卵白质的首要消化产品，在氨基酸消化、汲取和代谢中起侧首要效用。但酵母水解物与小麦水解卵白、大豆肽粉等专属的肽类卵白质料不同，它还含有核酸、多糖等其余大分子（约30%以上）。况且小肽的含量与酶解所用的酶制剂、增加比例、酶解时光、温度、pH值等均有必然的关连性，探测时在样本管教、国标、行业准则、实行室罕用探测法子等方面，尚不足系统、精准、可反复性的探测法子方面的公布报导。况且，酵母水解物做为一种强诱食性的卵白质料，惟独以新鲜酵母为质料，经充溢水解、枯燥后才干显露特有的鲜味，品控中心应以产品行使价钱为标的，以《饲料质料目录》中逼迫标帜请求为凭借。

　　是以，咱们临时不意见将小肽做为酵母水解物的常例目标加以评价，而该当将便利饲料企业探测、且能反映分娩品品格的目标，如粗卵白、氨基酸态氮、核酸、甘霖聚糖、水份、灰分等做为常例品控目标。

　　以上意见仅代表湖北海宜，不够之处还望偕行及用户多多海涵，并招待联合探究！

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